首页 > 技术优势 > 多肽FRET标记技术

多肽FRET标记技术

FRET(荧光共振能量转移)是一种距离依赖的通过将供体分子的激发态能量转移到受体分子,从而导致荧光淬灭的过程。这种技术可以检测分子在纳米范围内的相互作用。FRET多肽通常标记有标有供体分子(荧光基团)和受体分子(淬灭基团)。FRET多肽可以标记同一种荧光分子,但是在大多数情况下,荧光基团和淬灭基团是两种不同的染料分子。如果荧光受体是非荧光染料(淬灭基团),则荧光供体转移的能量将转化为分子振动。当FRET终止时(荧光供体和受体分离),可以检测到供体荧光的增加。当供体和受体均为荧光染料时,转移的能量将作为波长较长的荧光的光被发射出来,这样,供体和受体荧光的强度比例将会有一个改变从而可以被检测出来。 为了使FRET能够有效的进行,荧光分子和淬灭分子必须彼此接近(约10-100 Å),淬灭基团的吸收光谱必须与荧光基团的发射光谱要有重叠。因此在设计供体-淬灭剂FRET系统时,我们需要需要仔细比较供体的发射光谱和淬灭剂的吸收光谱。 鸿肽生物在FRET多肽的合成方面有着丰富的经验,我们可以为您的科研活动提供种类齐全的FRET荧光组合。

FRET过程示意图

Caspase-1水解底物多肽产生荧光的过程

TR-FRET(Time-resolved FRET)标记技术
TR-FRET是指使用稀土金属元素例如铕(Eu)作为荧光供体分子,这种荧光供体分子的荧光寿命要长于背景干扰荧光,其特点为斯托克位移(激发峰位和发射峰位的波长之间的差)大,使激发波和发射波之间的串扰降低,从而得到很高的信噪比。TR-FRET分析灵活,可靠,灵敏度高,通量高,且得到的假阳性/假阴性结果较少。 偶联DOTA的多肽通常被用于TR-FRET技术,通常通过DOTA将稀土金属元素螯合到多肽上。
常用的FRET荧光组合对

供体(荧光染料)

Trp (Tryptophan)

Trp (Tryptophan)

Mca (7-Methoxycoumarin-4-yl)acetyl)

Abz (2-Aminobenzoyl)

Abz (2-Aminobenzoyl)

Abz (2-Aminobenzoyl)

EDANS (5-[(2-Aminoethyl) amino]naphthalene-1-sulfonic acid)

Lucifer Yellow

FITC (Fluorescein isothiocyanate)

Dansyl (5-(Dimethylamino) naphthalene-1-sulfonyl)

5-TAMRA (Carboxytetramethyl rhodamine)

Eu(III) Chelate

颜色

最大吸收波长

280nm

280nm

325nm

320nm

320nm

320nm

340nm

430nm

490nm

342nm

547nm

340nm

最大发射波长

360nm

360nm

392nm

420nm

420nm

420nm

490nm

520nm

520nm

562nm

573nm

613nm

受体(淬灭基团)

Dnp (2,4-Dinitrophenyl)

4-Nitro-Z (4-Nitro-benzyloxycarbonyl)

Dnp (2,4-Dinitrophenyl)

pNA (para-Nitroaniline)

3-Nitro-Tyr (3-Nitro-tyrosine)

4-Nitro-Phe (4-Nitro-phenylalanine)

Dabcyl (4-(4-Dimethylaminophenylazo)benzoyl)

Dabsyl (4-(4-Diethylaminophenylazo)-benzenesulfonyl)

Dnp (2,4-Dinitrophenyl)

4-Nitro-Phe (4-Nitro-phenylalanine)

QSY7

QSY-7